照高效液相色谱法（中国药典2015年版四部通则0512）和质谱法（中国药典2015年版四部通则0431）测定。
色谱、质谱条件与系统适用性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂（色谱柱粒径1.7μm）；以乙腈为流动相A，水为流动相B，按表1梯度洗脱程序；流速为0.3ml/min。以质谱为检测器，电喷雾离子源负离子模式（ESI-），进行多反应监测（MRM），毛细管电压3.0kV，干燥气温度为400℃，干燥气流速为800L/Hr。选择m/z943.5→635.5、m/z943.5→797.5和m/z943.5→781.6为检测离子对，毛细管出口电压均为120V，碰撞（CE）分别为32eV、25eV和25eV。
表1梯度洗脱程序
时间（分钟） | 流动相A（%） | 流动相B（%） |
0 | 25 | 75 |
0~3 | 25→30 | 75→70 |
3~6 | 30→35 | 70→65 |
6~6.5 | 35→90 | 65→10 |
6.5~9.5 | 90 | 10 |
9.5~10 | 90→25 | 10→75 |
10~15 | 25 | 75 |
供试品溶液的制备 取本品大蜜丸或小蜜丸，剪碎，（或取水蜜丸，研碎），取约相当于柴胡0.5g的样品，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入含5%氨水试液的甲醇溶液50ml，密塞，称定重量，超声处理（功率500W，频率35kHz）30分钟，取出，放冷，再称定重量，用含5%氨水的甲醇溶液补足减失的重量，摇匀，过滤，取续滤液用0.22μm微孔滤膜滤过，即得。
测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各1μl，注入高效液相色谱-质谱联用仪，测定，即得。
结果判断 供试品的m/z943.5→635.5、m/z943.5→797.5和m/z943.5→781.6提取离子流色谱图中，应不得同时出现与对照品溶液色谱相应的色谱峰；若同时出现，则要求供试品中m/z943.5→635.5提取离子流图中色谱峰面积不得大于对照品m/z943.5→635.5提取离子流图中的色谱峰面积。
